柱層層析矽膠粉淺析矽膠柱層析的方法

柱層層析矽膠粉淺析矽膠柱層析的方法：

1.稱量，200-300目矽膠,稱30-70倍於上樣量,如果極難分,也可以用100倍量的矽膠H.幹矽膠的視密度在0.4左右,所以要稱40g矽膠,用燒杯量100ml也可以。

2.攪成勻漿，加入幹矽膠體積一倍的溶劑用玻璃棒充分攪拌.如果洗脫劑是石油醚/乙酸乙酯/丙酮體係,就用石油醚拌,如果洗脫劑是氯仿/醇體係,就用氯仿拌.如果不能攪成勻漿,說明溶劑中含水量太大,尤其是乙酸乙酯/丙酮,如果不與水配伍走分配色譜的話,必須預先用無水硫酸鈉久置幹燥.氯仿用無水氯化鈣幹燥,以除去1%的醇.如果樣品對酸敏感,不能用氯仿體係過柱。

3.裝柱，將柱底用棉花塞緊,不必用海沙,加入約1/3體積石油醚,氯仿,裝上蓄液球打開柱下活塞,將勻漿一次傾入蓄液球內.隨著沉降,會有一些矽膠沾在蓄液球內用石油醚,氯仿,將其衝入柱中。

4.壓實，沉降完成後,加入更多的石油醚,用雙聯球或氣泵加壓,直至流速恒定.柱床約被壓縮至9/10體積.無論走常壓柱或加壓柱,都應進行這一步,可使分離度提高很多,且可以避免過柱時由於柱床萎縮產生開裂。

5.上樣，幹法濕法都可以.海沙是沒必要的.上樣後,加入一些洗脫劑,再將一團脫脂棉塞至接近矽膠表麵.然後就可以放心地加入大量洗脫劑,而不會衝壞矽膠表麵。

6.過柱和收集，柱層析實際上是在擴散和分離之間的權衡.太低的洗脫強度並不好推薦用梯度洗脫.收集的例子,10mg上樣量,1g矽膠H,0.5ml收一餾分,1-2g上樣量,50g矽膠,200-300目,20-50ml收一餾分。

7.檢測，要更多地使用專用噴顯劑,如果僅用紫外燈,會損失較多產品,紫外的靈敏度一般比噴顯劑底1-2個數量級。

8.送譜，收集的產品旋幹,在送譜前通常需要重結晶.如果樣品太少或為液體,可過一小凝膠柱,作為送譜前的最後純化手段.可除去氫譜1.5ppm左右所謂的"矽膠"峰。

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